Artigo Original 1 - Ficocianina na Terapêutica de Lesões Cutâneas Induzidas em Ratos Envelhecidos (Estima – Brazilian Journal of Enterostomal Therapy, 2016)
RESUMOO objetivo deste trabalho foi avaliar a ação da fi cocianina na terapêutica de lesões cutâneas induzidas em ratos envelhecidos.Utilizaram-se 40 ratos machos envelhecidos com lesões de pele induzidas, divididos em 4 grupos: G1 (Ficocianina10%); G2 (Ficocianina 20%); G3 (Ficocianina 30%) e G4 (Controle positivo - Kollagenase®). Essas lesões foram analisadasquanto à contração cicatricial, quantidade de colágeno total, fi brose e células infl amatórias. Para análise estatística,foram utilizados o software Bioestat 5.0 e a comparação entre os tratamentos e, entre os parâmetros, foi utilizadoo teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, em nível de signifi cância de 5%. Os resultados com a pomada fi cocianinanas diferentes concentrações não apresentaram diferença estatística signifi cativa quando comparados aos resultadosda pomada Kollagenase®, porém, a pomada fi cocianina na concentração de 30% mostrou resultado semelhanteà pomada de referência. Conclui-se que o uso da fi cocianina em uma concentração de 30 % contribuiu positivamentepara cicatrização de feridas cutâneas em ratos.DESCRITORES: Cicatrização. Ficocianina. Envelhecimento.INTRODUÇÃOA pele é um órgão complexo, no qual a interação celulare molecular reguladas de modo preciso governam muitasdas agressões provindas do meio ambiente. É constituídapor vários tipos de células interdependentes responsáveispela manutenção da sua estrutura normal. Com o envelhecimentocronológico cutâneo, ocorre a modi cação domaterial genético por meio de enzimas, alterações proteicase o decréscimo da proliferação celular1. Esses eventospromovem a perda de tecido, da elasticidade e da capacidadede regular as trocas gasosas. A replicação do tecido setorna menos e ciente. As oxidações químicas e enzimáticasenvolvendo a formação de radicais livres (RL) aceleram oprocesso de senescência2.Com o envelhecimento, ocorrem modi cações nas células,resultando em uma diminuição da imunidade devidoà redução das células de Langerhans, aumentando, dessaforma, o risco de lesões na pele. Aliado a isso, ocorre tambéma diminuição dos melanócitos, o que reduz a proteçãoaos raios solares, a diminuição da produção de suor pelasglândulas sudoríparas, (resultando numa menor capacidadede termorregulação), bem como a redução da vascularizaçãoe da produção de colágeno3. Uma das consequênciasdas lesões de pele é a prevalência da polifarmácia, aumentandoo risco de reações autoimunes, porque a administraçãoconcomitante de vários medicamentos pode criar umasensibilidade muito maior para erupções da droga, podendosimular outras afecções cutâneas4.Nesse contexto, a busca de novas alternativas para otratamento de lesões de pele torna-se bastante importante.Existem perspectivas de desenvolvimento de novas tecnologiasque visam a acelerar o processo cicatricial e reduzir as complicaçõesque essas lesões podem acarretar5.A cicatrização é reconhecida como um processo sistêmicoque consiste em uma complexa sequência de eventoscoordenados e desencadeados pelo organismo que objetivareconstruir o tecido lesado sendo este substituído por tecidoconjuntivo vascularizado  broso5,6. Inicia-se com respostain amatória caracterizada pelo aumento do  uxo sanguíneo,permeabilidade capilar, migração de leucócitos paraa região lesada e extravasamento de plasma, formando oexsudato in amatório7,8.A cicatrização das feridas de espessura parcial ocorrepor regeneração das células epiteliais na superfície da ferida,essas células migram em direção à área lesionada, proliferando-se por mitose e incorporando-se à camada epitelial9.Já, nas feridas de espessura total, o processo de cicatrizaçãoocorre por segunda intenção e é bem mais complexo, envolvendouma sequência de eventos moleculares e celulares deforma ordenada e contínua10. Essa sequência, sob o pontode vista morfológico, é classi cada em três fases: in amatória,proliferativa e de remodelamento11.A fase in amatória e de hemostasia representa a primeirafase de qualquer processo de cicatrização, inicia-secom a ruptura de vasos sanguíneos e o extravasamento desangue e caracteriza-se pela participação ativa de inúmerascélulas e fatores do sistema imunológico12. Essa fase temduração de 48 a 72 horas, com então aparecimento de dor,calor, rubor e edema, sinais clássicos da in amação13.A segunda fase é a  broblástica, também chamada defase reconstrutiva ou proliferativa, denominada dessa formaporque, nesse período, a atividade predominante é a mitosecelular. Essa fase se estende de 12 a 14 dias6,9. As principais  características nessa fase são a formação do tecido de granulação,neoangiogênese, deposição de colágeno, contração daferida e reepitelização. Para a síntese desses componentes,os principais agentes estimulantes são as células endoteliais,os  broblastos e os queratinócitos3 .A terceira fase é a de remodelamento, também denominadapor alguns autores de fase de maturação, e consistena reorganização das  bras de colágeno e na substituiçãodo colágeno tipo III (imaturo) depositado de formadesorganizada pelo colágeno tipo I (maduro) disposta deforma organizada3 .Em diversos setores da área de saúde, o tratamentode feridas vem sendo um tema em destaque e a preocupaçãona busca de produtos que promovam a cicatrização éuma constante. Essa é uma prática milenar que, nos primórdiosda civilização, estava intimamente ligada a costumese hábitos populares e, com o desenrolar da história edo desenvolvimento tecnológico, conquistou seu merecidocunho cientí co9 .Dentre as novas tecnologias, encontra-se a Ficocianina,um pigmento extraído da Micoalga Spirulina platensis . Seupeso seco pode chegar a 20%14 , é considerada a principalresponsável pela atividade antioxidante e apresenta capacidadede ativar o sistema imunológico15 .O uso desse pigmento pode acelerar os processos decicatrização de feridas, haja vista a sua riqueza em vitaminaA e capacidade bactericida, pela presença de 2,4,4tricloro-2 hidroxi-difenil-éter, o qual é utilizado no tratamentode processos infecciosos16 . O potencial terapêuticoda Ficocianina tem sido relatado para  ns terapêuticos emhumanos e também em animais17 .A microalga possui e ciente atividade antiviral contravários vírus patógenos e tem também a capacidadede aumentar a resposta imunológica e estimular a funçãodos macrófagos18 .Existem muitas informações acerca do uso daFicocianina como medicamento, entre elas, cita-se opoder de cicatrização, mas ainda são insu cientes parasua comprovação.Ao partirmos do pressuposto que a Ficocianina acelerao processo de cicatrização em lesões de pele, este estudopossui o seguinte objetivo: veri car a ação da  cocianinana terapêutica de lesões cutâneas induzidas em ratos envelhecidoscom relação à contração cicatricial, quantidade decolágeno total,  brose e células in amatórias em comparaçãocom produto de referência – Kollagenase®.MÉTODO Os experimentos foram realizados no Biotério Central eno Laboratório de Bioquímica e Histologia do Institutode Ciências Biológicas (ICB) da Universidade de PassoFundo (UPF). Foram adotados os Princípios Éticos emExperimentação Animal, preconizados pelo Colégio Brasileirode Experimentação Animal (COBEA), instituição  liadaao International Council for Laboratory Animal Science  e aLegislação Brasileira de Animais de Experimentação, LeiFederal n.º 6.638 (1979).A Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidadede Passo Fundo (CEUA-UPF) aprovou o projeto desta pesquisacom o parecer 007/2011, com registro de número 002/2011na CEUA, que diz respeito à vida dos animais utilizados.Foram utilizados 40 ratos (Wistar hannover ) machos,nascidos e mantidos no Biotério Central da UPF, com idadeaproximada de 400 dias, alimentados com ração e água adlibitum  e com ciclo claro-escuro de 12 horas. Eles foramdivididos em quatro grupos com nº de 10 animais, e cadagrupo recebeu um tipo de tratamento conforme segue:• grupo 1 - G1 (Ficocianina 10%);• grupo 2 - G2 (Ficocianina 20%);• grupo 3 - G3 (Ficocianina 30%) e• grupo 4 - G4 (Controle positivo – Kollagenase®) pomadade referência. Durante todo o período de estudo, osanimais foram mantidos em gaiolas individuais, identicadas e acomodados sobre estantes horizontais.A pomada Kollagenase®, utilizada no grupo controle,foi usada como pomada de referência comercial no efeitocicatrização, a qual possui Registro no Ministério da Saúdesob nº 1.0298.0049, um  brinolítico de uso adulto comações terapêuticas cicatrizantes.A Ficocianina foi obtida no Laboratório de Bioquímicade Alimentos e de Bioprocessos da UPF. Esse pigmentofoi extraído da cianobactéria Spirulina platensis , a qual foiprocedente do Laboratório de Engenharia Bioquímica daFundação Universidade Federal de Rio Grande – FURG.A manipulação dessa pomada foi realizada pela farmáciade manipulação Artesani da cidade de Erechim/RS,Brasil. Os excipientes para formulação da pomada foramo extrato de Ficocianina nas porcentagens utilizadas paracada grupo, 10, 20 e 30%, as quais foram adicionadas emcreme base na quantidade su ciente para completar afórmula (QSP). Os animais foram submetidos a jejum de 2 horas préviasao procedimento cirúrgico. Para os procedimentoscirúrgicos, os ratos, após pesados, foram anestesiados como uso de Zoletil 50 mg, sendo administrado via intramuscularna dose de 40 mg/kg de peso corporal no músculo dapanturrilha dos ratos.A técnica operatória, após tricotomia, consistiu em excisãode espessura total de pele com 20 mm de circunferência,utilizando-se um punch para demarcar a área e auxíliode um bisturi. A hemostasia foi realizada por compressãodigital, utilizando-se gaze esterilizada.Para a aplicação das pomadas nos diferentes grupos,foi realizada a limpeza da lesão com soro  siológico(NaCl 0,9%) em jato na temperatura ambiente, o qual foifeito através de uma seringa de 20 mL com uma agulha40x12 mm na ponta9 . Na sequência, foram aplicadas 0,5ml da pomada utilizada em cada grupo, quantidade su -ciente para cobrir toda a lesão que foi mantida aberta.Esse procedimento foi realizado durante 18 dias consecutivosuma vez por dia.A contração cicatricial foi avaliada através da análisecomputadorizada de fotos digitais padronizadas. A documentaçãofotográ ca foi feita logo após o procedimentocirúrgico e em diferentes tempos do pós-operatório (po):0º po; 4º dia po; 12º dia po; 18º dia po.As imagens das lesões foram digitalizadas e analisadaspelo programa Imagem Tool  e sua área quanti cada emcentímetros quadrados.Cada imagem avaliada foi calibrada pelo programa,utilizando a régua adjacente à ferida. A seguir, com auxíliode um mouse, procedeu-se o contorno manual da imagem.Astaxas de contração cicatricial das feridas excecionaisforam obtidas subtraindo-se a área cruenta inicialdo pós-operatório imediato, em cada animal, pela áreacruenta em cada tempo pós-operatório.As biópsias foram realizadas no sétimo dia depós-operatório por excisão da área total da lesão e, emseguida, foi praticada a eutanásia do animal biopsiado.As amostras de feridas foram colocadas em frascos comformol a 10%, identi cados e armazenados em temperaturaambiente. Os40casos foram processados e confeccionadaslâminas coradas pela Hematoxilina-eosinae pelo Picro-sirius.Para análise estatística, foi utilizado o softwareBioestat 5.0 e, para realizar a comparação entre os tratamentose entre os parâmetros, foi utilizado o teste nãoparamétrico de Kruskal-Wallis, em nível de signi cânciade 5%. Comoteste post hoc , usou-se o método de Dunn.Utilizou-se estatística descritiva para identi cação demédia e desvio padrão.As lâminas foram analisadas por médico patologista,o qual não obteve acesso a qual grupo a lâmina pertencia,sendo que cada lâmina foi identi cada por númeroarábico para a descaracterização. Foram analisados osseguintes parâmetros: In ltrado In amatório, Colágeno eFibrose. Cada parâmetro foi categorizado como: 0=semvalor para o parâmetro; X = pouco valor para o parâmetro;XX = valor moderado para o parâmetro e XXX = valorintenso do parâmetro.Todos os casos foram analisados no mesmo microscópioNikon Eclipse E200, com objetivas E Plan 4X, 10 X,20 X, 40 X.Portanto, os valores obtidos na análise dos parâmetrosforam marcados como valores inteiros 0, 1, 2 e 3, respectivamenteaos valores 0, X, XX e XXX.RESULTADOS E DISCUSSÃO A Tabela 1 apresenta a média da avaliação da contraçãocicatricial nos 4 grupos das feridas induzidas nos ratos nodia 1, 4, dia 12 e dia 18.Observa-se, na Figura 1, que o comportamento cicatricialdas feridas tratadas por qualquer uma das formulaçõesdeclinou em tamanho na mesma proporção.Exceção nesse comportamento pode ser observada paraFicocianina a 10%.A Figura 2 retrata as quanti cações do colágeno total,fibrose e células inflamatórias, resultados da análise nosétimo dia, indicando os valores dos parâmetros. O valorzero indica que não há valor para o parâmetro; 1 = poucovalor; 2 = valor moderado; 3 = valor intenso.Para compor os valores de cada parâmetro, entreos tratamentos, foi utilizado o teste não paramétrico deKruskal-Wallis , em nível de signi cância de 5%. Observa-seque não existe diferença estatisticamente signi cativa entreos valores dos parâmetros, Colágeno, In amação e Fibroseconforme a Tabela 2.A Figura 3 apresenta a distribuição dos valores médiosdos parâmetros de cada tratamento, bem como seus respectivosdesvios-padrão. Apesar de o teste aplicado paracomparações dos valores dos parâmetros de cada tratamento não ser paramétrico (Kruskal-Wallis ), ou seja, não se basearna média, os pesquisadores optaram por mostrar o comportamentomédio com seus respectivos desvios-padrão,uma vez que é uma medida estatística de mais fácil visualização.Osvalores do desvio-padrão são relativamentealtos, conforme observados na Figura 3, em particularpara a in amação.Nesta pesquisa, utilizou-se o rato da linhagem Wistar ,pois, biologicamente, apresenta características facilitadorascom relação a manuseio e acompanhamento, além de boaresistência à manipulação, agressão cirúrgica e baixo custo.Optou-se por utilizar ratos machos, pois variações dos cicloshormonais das fêmeas poderiam interferir no mecanismodo processo de cicatrização19 .Um estudo20  evidenciou uma desaceleração da atividademetabólica dos  broblastos com o envelhecimentoe estes perderam a sua capacidade de aderir às  bras decolágeno, limitando a possibilidade de organização dotecido dérmico.A quantidade de colágeno total apresenta seu primeiropico de produção por volta do 7º dia após a lesão, continuandoem ascensão até o 14º dia e, após, com o decorrer  da fase de remodelamento, é estabelecido um equilibro entrea síntese e a degradação das  bras colágenas21 . No presenteexperimento, foi observada maior quantidade do colágenototal das feridas excecionais do grupo G2 e G3, mostrandoque os grupos tratados com Ficocianina em maior concentraçãoapresentam-se em fase mais adiantada do processode cicatrização da lesão.Os extratos testados de Spirulina , que dá origem aFicocianina, revelaram a presença de  avonóides, alcalóidese triterpinoides. Os  avonóides são conhecidos por reduzira peroxidação lipídica não só através da prevenção ouinibição da peroxidação lipídica, acreditando-se que sejapara aumentar a viabilidade de  bras de colágeno atravésda promoção da síntese de DNA. Assim, a propriedade decicatrização de Spirulina , pode ser atribuída aos  toconstituintespresentes nela22 .No presente estudo, os G2 e G3, apesar de não apresentaremvalores estatísticos signi cativos, mostraramvalores semelhantes e com menor número de célulasin amatórias no sétimo dia quando comparados com oG1, podendo-se, dessa forma, concluir que, com relaçãoà reação in amatória, esses 2 grupos estão mais próximosdo resultado da pomada de referência (G4). Já no grupoG1, pode-se concluir que houve um atraso na primeirafase da cicatrização devido à presença de maior númerode células in amatórias no sétimo dia.Um estudo comparativo entre Extrato de Levedura,Levedura de Cerveja e Spirulina  como complemento nadieta de peixes com objetivo de avaliar o crescimento eresposta hemato-imunológica de peixes evidenciou que aFicocianina possui e ciente atividade antiviral contra váriosvírus patógenos e tem capacidade de aumentar a respostaimunológica e estimular a função dos macrófagos18 .Em recente pesquisa23  realizada em ratos com lesõesde pele induzida, a aplicação de Ficocianina acelerou a primeira fase da cicatrização de feridas, rea rmando osachados deste estudo.Durante o 2º e 3º dias pós-trauma, os  broblastos agemprincipalmente na proliferação e migração celular, formandobrose24 . Com estímulos adequados, os  brócitos revertem-separa o estado de  broblastos e mio broblastos, reativandosua capacidade de síntese24 .Neste estudo, observou-se maior número de  broseno grupo tratado com pomada em maior concentração deFicocianina (G3), o que sugere que em tal grupo, no 7º diapós-operatório, a fase de proliferação celular está mais adiantadado que nos grupos tratados com pomada em menorconcentração de Ficocianina (G1 e G2). Em estudo23  realizado para examinar a propriedadedecicatrização de Ficocianina em relação à proliferação de brócitosem ratos, foi observado que a referida substânciaaumentou a proliferação destes de maneira signi cativa.Nesse mesmo estudo, os autores salientam que os dadostangenciam o uso terapêutico da Ficocianina como agentecicatrizante de feridas.Neste estudo, a análise das áreas cruentas das feridasexcisionais mostrou haver maior taxa de contração, levandoa valores menores de área cruenta nos grupos tratados compomada em maior concentração de Ficocianina, ou seja, 30%.Presente no tecido de granulação, o mio broblastoé o principal tipo celular envolvido no reparo tecidual através da deposição de componentes da matriz extracelular(tenascina,  bronectina, metaloproteinases e colágenosI e III)25 . As melhores taxas de fechamento das feridasdos grupos tratados com a pomada de Ficocianina 30%podem ter relação com o número e/ou o aumento da funçãodos mio broblastos.As feridas não cicatrizadas geram problemas socioeconômicos,com diminuição da produtividade e da qualidadede vida dos indivíduos acometidos, o que podeser agravado se não for tratado com uma terapia tópicaadequada21 .As limitações deste estudo referem-se às característicasinstintivas e anatômicas dos animais, não sendo possívelmanter as lesões fechadas com gaze, o que diminuiu umpouco o tempo de umidade oferecida ao leito da ferida, bemcomo a absorção da exsudação quando necessário.CONCLUSÃOConclui-se que o uso da pomada de Ficocianina na concentraçãode 30% mostrou resultado semelhante à pomadade referência – Kollagenase®, sendo capaz de promover acontração mais rápida de feridas pela aceleração da primeirafase da cicatrização e reação in amatória, maior concentraçãode  brose e produção de colágeno total se comparada àpomada de referência no mercado.É válido ressaltar que a Ficocianina acelera o processocicatricial, caracterizando-se como um tratamentoe ciente e de baixo custo. Sugere-se novas pesquisas parapossível aplicação em seres humanos, o que possibilitariaminimizar o sofrimento de pessoas com lesões cutânease aprimorar a terapêutica disponível com melhor custoaos cofres públicos. REFERÊNCIAS1. Fontes IJG. Antioxidantes como substâncias cosmetologicamenteactivas [dissertação]. Lisboa: Universidade Lusófona deHumanidades e Tecnologias; 2013.2. Santos MP. O papel das vitaminas antioxidantes naprevenção do envelhecimento cutâneo. 2013 [citado em2014 Ago 18]. Disponível em: http://bibliodigital.unijui.edu.br:8080/xmlui/bitstream/handle/123456789/1571/TCC%20Mirelli%20P%20dos%20Santos.pdf?sequence=13. Cohen VDF, Prazeres SJ, Silva ACB. Aspectos morfológicosdo tecido tegumentar. In: Prazeres SJ (org.). Tratamento deferidas: teoria e prática. Porto Alegre: Moriá; 2009. p. 5-36.4. Farage MA, Miller KW, Berardesca MH, Maibach HI. Clinicalimplications of aging skin: cutaneous disorders in the elderly.Am J Clin Dermat. 2009;10(2):73-86.5. Mendonca RJ, Coutinho-Netto J. Aspectos celulares dacicatrização. An Bras Dermatol. 2009;84(3):257-62.6. Farina Junior JA, Almeida CEF, Garcia FL, Lima RVKS,Marques RM, Cologna MHT. Tratamento multidisciplinar deferidas complexas. Proposta de criação de “Unidades deFeridas” no Hospital das Clínicas da FMRP-USP. Medicina.2013;46(4):355-60.7. Hildebrand KA, Gallant-Behm CL, Kydd AS, Hart DA. Thebasics of soft tissue healing and general factors thatinfl uencesuch healing. Sports Med Arthrosc Rev. 2005;13(3):136-44.8. Martin P, Leibovich SJ. Infl ammatory cells during woundrepair: the good, the bad and the ugly. Trends Cell Biol.2005;15(11):599-607.9. Silva RCL, Figueiredo NMA, Meireles IB, Costa MM, Silva CRL.Feridas: fundamentos e atualizações em enfermagem. SãoCaetano do Sul: Yendis; 2007.10. Santos JBD, Porto SG, Suzuki LM, Sostizzo LZ, AntoniazziJL. Avaliação e tratamento de feridas: orientações aosprofi ssionais de saúde. 2011 [citado em 2014 Ago 20].Disponível em: http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/handle/10183/34755/000790228.pdf11. Chow O, Barbul A. Immunonutrition: role in woundhealing and tissue regeneration. Adva Wound Care.2014;3(1):46-53.12. Mathes SJ, Hentz VR. Plastic surgery. Philadelphia, PA:Saunders Elsevier; 2006.13. Hatanaka E, Curi R. Ácidos graxos e cicatrização: umarevisão. Rev Bras Farm. 2007;88(2):53-8.14. Souza FT, Margarites AC, Colla LM, Costa JAV, Bertolin TE.Avaliação ao potencial antioxidante da fi cocianina emsistema lipídico óleo de soja e azeite de oliva. Alimentos eNutrição. 2007;17(3):275-79.15. Chen HW, Yang TS, Chen MJ, Chang YC, Chen-Wang EI,Ho CL, et al. Purifi cation and immunomodulating activityof C-phycocyanin from Spirulina platensis cultured usingpower plant fl ue gas. Process Biochem. 2014;29(8):1377-44.16. Trabelsi L, Ouada HB, Bassa H. Activités biologiques desmétabolites excrétés par la cyanobactérie fi lamenteuseArthrospira platensis. Phytothér. 2010;8(5):282-9.17. Ambrosi MA, Reinehr CO, Bertolin TBP, Costa JAV, Colla LM.Propriedades de saúde de Spirulina spp. Rev Ciênc FarmBásica e Apl. 2008;29(2):109-17.18. Andrews SR, Sahu NP, Pal AK, Mukherjee SC, Kumar S. Yeastextract, brewer’s yeast and Spirulina in diets for Labeo rohitafi ngerlings aff ect haemato-immunological responses andsurvival following Aeromonas hydrophila challenge. Res VetSci. 2011;91(1):103-9.19. Pereira T, Santos D, Lima-Ribeiro MHM, Pontes-Filho NT,Carneiro-Leão AMDA, Correia MTDS. Development of animalmodel for studying deep second-degree thermal burns.J Biomed Biotechnol. 2012. Disponível em: www.hindawi.com/journals/jbb/2012/460841/cta/.20. Monteiro M, Peixoto B. Behavioural Assessment of theDysexecutive Syndrome (BADS) on the context of normaland pathological aging. Rev Bras Geriatr Gerontol. 2014;17(2):407-416.21. Guo S, Dipietro LA. Factors aff ecting wound healing. J DentRes. 2010;89(3):219-29.22. Panigrahi BB, Panda PK, Patro VJ. Wound healing activity ofspirulina extracts. International Journal of PharmaceuticalSciences Review and Research. 2011;6(2):132-5.23. Madhyastha H, Madhyastha R, Nakajima Y, Omura S,Maruyama M. Regulation of growth factors-associatedcell migration by C-phycocyanin scaff old in dermal woundhealing. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2012;39(1):13-9.24. Sonnemann KJ, Bement WM. Wound repair: towardunderstanding and integration of single-cell and multicellularwound responses. Annu Rev Cell Dev Biol. 2011;27:237-63.25. Pristo I. Cicatrização de feridas: fases e fatores de infl uência.Acta Veterinaria Brasílica. 2013;6(4):267-71.